Τετάρτη, 25 Δεκεμβρίου 2013 20:49

Ελεύθερα κυκλοφορούντα καρκινικά κύτταρα

Γράφτηκε από την
Βαθμολογήστε αυτό το άρθρο
(1 Ψήφος)

Μοριακός έλεγχος για ανίχνευση ελεύθερων κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων και ογκολογικών παραγόντων σε περιφερικό αίμα

Γράφει ο

Δρ. Σωτήρης Νικολόπουλος

Moριακός Ογκολόγος, PhD, MS

Το τεστ  «μοριακός έλεγχος για ανίχνευση ελεύθερων κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων και ογκολογικών παραγόντων σε περιφερικό αίμα» γίνεται και στην Ελλάδα.

Αποτελεί ένα σημαντικό εργαλείο για την παρακολούθηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας στον ογκολογικό ασθενή, αλλά και της πρόγνωσης για την έκβαση της νόσου του.

Γιατί η έρευνα και η επιστήμη εξελίσσεται και στην Ελλάδα.


ΜΕΘΟΔΟΛΟΓΙΑ

Πραγματοποιείται απομόνωση ολικού RNA (total RNA) από 1ml περιφερικού αίματος με το αντιδραστήριο Trizol-BD.

Aκολούθως πραγματοποιείται πέψη τυχόν μορίων DNA από την απομόνωση του RNA κατόπιν επώασης με το ένζυμο DNAse Ι (RNAse-free).

Στη συνέχεια γίνεται μετατροπή του ολικού RNA σε συμπληρωματικό DNA (cDNA) με το ένζυμο αντίστροφη μεταγραφάση (reverse transcriptase).

Εφαρμόζεται η μέθοδος της ποσοτικής qRT-PCR σε πραγματικό χρόνο με σκοπό τον συγκριτικό προσδιορισμό της γονιδιακής έκφρασης (gene expression) των γονιδίων που κωδικοποιούν:

1) την Guanyl Cyclase C (GCC)

2) το αντιγόνο CD24

3) το αντιαποπτωτικό γονίδιο survivin

4) την κυτταρική γλυκοπρωτείνη mucin1

5) την κυττοκερατίνη 19 (CK-19),

6) την κυττοκερατίνη 20 (CK-20),

7) το καρκινοεμβρυονικό αντιγόνο (CEA) και

8) το γονίδιο αναφοράς GAPDH (glyceraldehyde phosphate dehydrogenase)

Ο προσδιορισμός πραγματοποιείται έχοντας σαν template τα συντιθεμένα cDNAs σύμφωνα με δημοσιευμένες εργασίες και σε σύγκριση με αντίστοιχα cDNAs δείγματος υγιούς κοντρόλ.

Οι εκκινητές DNA (οligos) που χρησιμοποιούνται για τα ελεγχόμενα mRNAs προέρχονται από την IDTDNA (USA).

Σαν controls για την αντίδραση PCR και των εκκινητών χρησιμοποιούνται cDNAs από αντίστοιχο δείγμα αίματος υγιούς ατόμου.

Σαν αρνητικό control για την αντίδραση PCR χρησιμοποιείται cDNA από το εξεταζόμενο δείγμα χωρίς εκκινητές.

Τα αποτελέσματα τέλος αξιολογούνται κατάλληλα σε συνδυασμό με τα υπόλοιπα κλινικά κι εργαστηριακά ευρήματα του ασθενούς.

Διαβάστε, επίσης,

Κυκλοφορούντα καρκινικά κύτταρα

Πώς ένα τσιπ ανιχνεύει τον καρκίνο

Γράφει ο

Δρ. Σωτήρης Νικολόπουλος

Moριακός Ογκολόγος, PhD, MS

Διαβάστε, περισσότερα για τον Σωτήρη Νικολόπουλο

 

 

 

 

Διαβάστηκε 2240 φορές Τελευταία τροποποίηση στις Τετάρτη, 25 Δεκεμβρίου 2013 21:12
Σαββούλα Μάλλιου Κριαρά

Αυτή η διεύθυνση ηλεκτρονικού ταχυδρομείου προστατεύεται από τους αυτοματισμούς αποστολέων ανεπιθύμητων μηνυμάτων. Χρειάζεται να ενεργοποιήσετε τη JavaScript για να μπορέσετε να τη δείτε.